细胞凋亡 你真的懂吗?

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导读

你真的懂凋亡吗?细胞的一生犹如似秋叶的凋零,告别生命的辉煌;难以计数的攻击、诱导,轻启着道道程序逼细胞步步走向生命的末端;活性氧处处肆虐,钙波涛惊石裂岸,线粒体把生命之光一点一点拧淡。本期,我们就来聊聊细胞凋亡。

凋亡那些事

细胞凋亡(英语:apoptosis,源自希腊语: απ?πτωσι?,有堕落,死亡之意),为一种细胞程序性死亡。相对于细胞坏死(necrosis),细胞凋亡是细胞主动实施的。细胞凋亡一般由生理或病理性因素引起。而细胞坏死则主要为缺氧造成,两者可以很容易通过观察区分开来。在细胞凋亡过程中,细胞缩小,DNA被核酸内切酶降解成180bp-200bp片段属于有层次之断裂,(可以通过凝胶电泳证明),而细胞坏死时,细胞肿胀,细胞膜被破坏,通透性改变。细胞器散落到细胞间质,需要巨噬细胞去清除,结果是该局部组织发炎。相比起细胞坏死,细胞凋亡是更常见的细胞死亡形式 ...

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细胞凋亡的检测手段


 TUNEL细胞凋亡检测程序

TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核  DNA的断裂情况,其原理是生物素biotinylate标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可  以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端,并与连接辣根过氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的链霉亲和  素streptavidin特异性结合,后者又与POD底物H2O2、二氨基联苯胺(DAB)产生深棕色反应,特异准确地定位正在凋  亡的细胞,因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂,因而没有3‘-OH形成,很少能够被染色 ...点击→查看更多


 电子显微镜检测法检测细胞凋亡

具有凋亡特征的细胞程序性死亡后,可在扫描或透射电镜下观察到“凋亡小体”,该小体系由细胞膜卷曲、脱落形成的   小泡,其内包含有完整的细胞器及核片段。这种小体易被巨噬细胞、上皮细胞等吞噬,借以清除正常发育过程中死亡的   细胞。细胞坏死则无此小体形成。但是并非所有发生程序性死亡的细胞皆形成凋亡小体...点击→查看更多





 Caspase 3 活性测定(FIENA法)检测细胞凋亡

Caspase3 的激活在凋亡过程的细胞事件启动中起着重要作用,有证据表明,在蛋白酶级联切割过程中,Caspase 3处于核心位置。本法运用荧光酶联免疫吸附法(flurometric immunosorbent enzyme assay, FIENA)的原理, Caspase3激活后会作用于其特异的底物:乙酰化天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酰胺(Ac-DEVD),如将Ac-DEVD与荧光素连接(Ac-DEVD-AFC),即会产生荧光裂解产物AFC,而且caspase3的活性与Ac-DEVD-AFC的分解量或自由荧   光产生荧光的强弱成正比。本法可用于各种培养细胞凋亡诱导研究,而且灵敏度高,特异性强(特异性的抗caspase 3单克隆抗体),与其他已知的caspases无交叉反应...点击→查看更多


流式细胞仪检测细胞凋亡:Annexin V/PI双染色法


细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白,最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白,Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性。对PS有高度的亲和性 ...点击→查看更多


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