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细胞的原代培养实验

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标签: 细胞 原代 传代培养

本实验目的是了解原代培养的原理,初步掌握哺乳动物细胞的原代培养的基本操作过程,为生物工程在医学上的应用打下基础同时也能掌握无菌操作技术。

实验方法原理

细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来,广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域,发展成一种重要生物技术,并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短,性状与体内相似,适用于研究。一般说来,幼稚状态的组织和细胞,如:动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。

实验材料

胎大鼠

试剂、试剂盒

1640培养液 PBS 胰蛋白酶 EDTA混合消化液 乙醇

仪器、耗材

手术器械 细胞培养皿 细胞培养瓶 吸管 离心管 煤气灯 烧杯 超净工作台 二氧化碳培养箱 倒置显微镜

实验步骤

1.  取材  
用颈椎脱位法使胎大鼠迅速死亡。然后,把整个动物浸入盛有75%乙 醇的烧杯中数秒钟消毒,取出后放在大平皿中携入超净台。用消过毒的 剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的皮肤,剖腹取出肝脏或肾脏,置于 无菌细胞平皿中。
2.  切割
用灭菌的PBS 液将取出的脏器清洗三次,然后用眼科手术剪刀仔细将 组织反复剪碎,直到成1 mm3 左右的小块,再用PBS 清洗,洗到组织块 发白为止。移入无菌离心管中,静置数分钟,使组织块自然沉淀到管底, 弃去上清。
3.  消化、接种培养

吸取0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA 混合消化液1 ml,加入离心管中, 与组织块混匀后,加上管口塞子,37 ℃水浴中消化8~10 分钟,每隔几 分钟摇动一下试管,使组织与消化液充分接触,静止,吸去上清,向离心管中加入5~10 ml 含10%小牛血清的1640 培养基,用吸管吹打混匀, 移入二个细胞培养瓶中,置于二氧化碳培养箱中培养。

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