细胞分布不均及解决办法

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问:我的细胞接种培养板,细胞总是聚集在周边部分,该如何处理啊?我看园子里有的战友的细胞却是聚集在中间,是不是板子的质量问题啊?
答:请问你的细胞是如何混匀的?是滴管吹打还是振荡培养板?如果是后者,而且是转圈摇匀的话,很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分,导致细胞中间少,四周多!自己可是试试!
周边一般是相对会多一点,但是中间的数量也不会很少啊~~ 铺板的时候我也没有特异去振荡培养板。
大概是板子的质量问题吧或者是不是铺板时候的细胞密度太低了?我用的是WHB细胞培养
一个好办法:在你培养种板之前,把培养板放入培养箱里进行几个小时的饱和后再取出,种入细胞时力量要轻,可采取用滴头在培养板孔的侧面慢慢加入让细胞悬液流入板孔中,培养的细胞基本是均匀生长。记住千万不要用振荡器振荡,否则你的细胞就会想你说得那样聚积在一起。
我今天把培养板放入培养箱里几个小时,适当的把细胞密度加大了一下,另外多加了一点培养液,今晚看细胞铺的挺好的。
我认为有两种可能解决你问题的办法:
1.加入前吹打均匀;
2.从多孔板侧边或底边缓慢加入。
我在做原代培养时也遇到过这种情况,我一直以为细胞培养皿铺胶不均匀会导致这种现象,因为混匀的血管段加入到培养皿中时,在相差显微镜下血管段均匀分布在培养皿中,24h后贴壁的血管段就是周边多,中间相对少些。下次我要试试hkqu战友的方法看能否改变这种现象。谢谢指点!
这种现象很正常呀,不知你仔细观察过没有,孔直径愈小,这个现象越明显,我试过,24、96孔板这种现象不可避免,因为液体的附壁使得孔内培养液不是成一个液平面,而是周边高,就像凹镜一样,而使用这两种孔板由于需要加干预等原因而不能加足量培养液,使得细胞随培养液一起出现“边集”现象,如果为了使孔中央也有均匀细胞而增加接种细胞数量的话,这要看你需要观察何种指标,如果是MTT ,免疫组化的话会因为细胞成层而影响结果。
赞成hkqu战友的建议,个人认为消化细胞时要注意吹打均匀,避免细胞成团,而且孔内培养液量要足够,我一般接种时加足量培养液,加干预时换一次液,干预液加培养液量等于接种时培养液量,这样的话“边集”现象会有所改观,不妨一试。
我想我们做课题,实验的目的是为了验证或探索某些理论,而不是要所谓的“好看”,“美”。还记得鲁迅先生的文章《藤野先生》一文吗?我们很多年以前学过的,藤野先生对鲁迅先生说得话大家不防重温一下,我想这正是我们要学习的地方。
我做的是空斑形成实验,最好是细胞铺成均匀的一层,昨天接种病毒时大部分孔都还好,个别的不太均匀。
现在我细胞实验也做了一段时间了,但在实验中平行组的差距还是比较大。
有时候一组数据大多是差不多的,偏偏会跳出一个相去甚远的数据。
我想应该不是我细胞加入时的问题,因为我的组间差距大是出现在加样的组中,而对照组的数据却相当的稳定。另外,我的样品是完全均匀的液体,照理应该是不会出现上述问题的。
我也出现了这样的问题。我加入细胞的时候是用吸管边吹打边用一毫升的枪加入12孔板中的,可是组内差异仍然很大,想请教一下大家加细胞的时候都有什么方法呀?
我觉得有几点:
1.细胞消化后吹打成单细胞悬液很关键!保证分板时每个孔的细胞数目是一致的!
2.当然还有你的处理因素各个孔之间的平行也很重要,比如说加药时,药物稀释后混匀,保证每个孔的浓度是一致的!
3.再者加细胞和药物时,要试验组和对照组一块轮流加,避免加样先后顺序导致细胞密度和药物浓度的差异!!
吹打已经是均匀了,但是铺板,6孔,24孔总有些不均匀的哦,有点爱往中间集中。而且明明计数好了铺了,长一两天,各个孔密度就有点不一样,对检测有影响,能指教一下,有良策吗?
1.如果用巴氏吸管铺的话,每次吸取的量不要太多,因为吸管内的细胞会自动向下沉,往往第一开始几个孔细胞数多,经常均匀细胞悬液,加液走S型路线。
2.如果用移液器的话,tips要处理下,把尖端去掉避免损伤细胞,这样每一次取液对应一个孔。用tip一对一孔加入比较准确。但也要注意混匀悬液。
3.设立平行组,n要足够大(可以计算一下)。
4.铺板后不要摇,因为摇动会导致细胞向中间聚集。最好铺板一次搞定。
铺板后不要做圆周的晃动,做十字晃动,即上下左右晃动,否则会使细胞旋到当中去。
移液器的枪头沿着培养板壁加,就不会集中到中间了。

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